辅助生殖工程来源的人胚胎干细胞传代培养过程中基因组变异及其对诱导分化的影响

项目名称： 辅助生殖工程来源的人胚胎干细胞传代培养过程中基因组变异及其对诱导分化的影响

项目编号： No.31271605

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 生物科学

项目作者： 孙莹璞

作者单位： 郑州大学

项目金额： 87万元

中文摘要： 人胚胎干细胞系（hESCs）基因组变异直接影响临床应用的安全性。项目组通过近8年对辅助生殖工程来源的hESCs的研究、结合最新研究进展，拟从新的角度深入分析传代培养过程中hESCs的基因组拷贝数变异（CNVs）和外显子组序列的变化，探讨变异对hESCs全能性和诱导分化的影响。拟采用HumanOmniZhongHua-8单核苷酸多态性（SNPs）芯片和人外显子组测序技术检测不同传代数的hESCs、诱导分化的脂肪干细胞和神经干细胞基因组SNPs和CNVs；利用生物信息学方法分析CNVs和外显子序列变化，用RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光进行变异相关基因的功能验证。回答传代培养过程中的基因组CNVs是否同时存在外显子序列信息的变异，以及这些变异是否对体外诱导分化效率、分化后细胞的生物学功能以及体内移植细胞存活、迁移和分化产生影响？为hESCs的临床应用提供遗传安全性的实验和理论基础。

中文关键词： 人胚胎干细胞；单核苷酸多态性；拷贝数变异；杂合性缺失；分化

英文摘要： The stability of the genome in human embryonic stem cells (hESCs) directly affect the safety of clinical applications .Our research group analyse the researches on assisted reproductive engieering based hESCs in the past eight years, combined with the latest research progress，and are going to give a further analysis on variations of CNVs and exome sequencing of hESCs genome during long-term culture from a new perspective，exploring the influence of variations on biological character and induced differentiation and uncover the molecular mechanism of variations further. We will detect single nucleotide polymorphisms(SNPs) and copy number variationss (CNVs) in genome of hESCs , adipose derived stem cells and neural stem cell from different passages by using SNPs microarray(humanOmniZhongHua-9 Chip) and human exome sequencing technology. Analyzing variations of CNV and exome sequencing by bioinformatic methods. Verifing the function of the corrresponding mutant gene by RT-PCR, westernblot and immunofluorescence. To clear whether the variations of the CNVs is accompanied with variations of the exome sequencing during the long-term culture, and whether these variations influence the differentiation efficiency in vitro culture,the biological function of the differentiated cells and the survival rate,migration rate

英文关键词： human embryonic stem cells；single nucleotide polymorphism；copy number variations；loss of heterozygosity；differentiation