苹果花粉γ-硫堇蛋白在自交不亲和反应中的作用机制研究

项目名称： 苹果花粉γ-硫堇蛋白在自交不亲和反应中的作用机制研究

项目编号： No.31372035

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 农业科学

项目作者： 李天忠

作者单位： 中国农业大学

项目金额： 85万元

中文摘要： S-RNase是苹果花柱自交不亲和决定子。我们用S-RNase为诱饵筛选花粉酵母cDNA文库获得一个γ-硫堇，从γ-硫堇削弱S-RNase抑制花粉管生长等离体实验初步推断γ-硫堇可能作为S-RNase活性抑制剂参与了自交不亲和反应。因此，本研究首先通过S-RNase活性位点及其突变前后与γ-硫堇体内外互作明确γ-硫堇是否只结合到S-RNase活性位点区；其次通过两蛋白共孵育检测S-RNase酶活及添加培养花粉管明确γ-硫堇是否能抑制S-RNase活性；最后利用反义寡核苷酸转染沉默γ-硫堇的苹果花粉及转矮牵牛γ-硫堇的花粉分别自异花授粉，观察花粉管生长，统计结实率，并通过双荧光原位免疫杂交技术标记两种蛋白在苹果自异花授粉后花粉管内位置，判定γ-硫堇能否调控自交不亲和反应，观察γ-硫堇是否与S-RNase结合及可能抑制其活性方式。最终明确γ-硫堇通过抑制S-RNase活性参与自交不亲和反应。

中文关键词： 苹果；Ca2+-ROS-JA-MdMYC2信号；花粉MdD1；防御应答；花柱S-RNase

英文摘要： S-RNase is a determinant factor of self-incompatibility in apple style. Using yeast two hybrid assay, a γ-thionin gene was obtained by screening a pollen cDNA library with S- RNase as bait. Pre-experiment of pollen culture showed that γ-thionin may take p

英文关键词： apple；Ca2+-ROS-JA-MdMYC2 pathway；pollen MdD1；defense response；style S-RNase