新型DiLeu标记定量方法及其在解析肿瘤转移关键因子PKCζ相关动态分子网络中的应用研究

项目名称： 新型DiLeu标记定量方法及其在解析肿瘤转移关键因子PKCζ相关动态分子网络中的应用研究

项目编号： No.21205088

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 分析化学

项目作者： 陈瑞冰

作者单位： 天津医科大学

项目金额： 23万元

中文摘要： 肿瘤转移是导致癌症患者死亡的主要原因，而目前国际上尚无有效的治疗方法。趋化运动在癌转移中起着关键的作用。我们的研究显示表皮生长因子（EGF）通过活化PDK1/AKT2/PKCζ通路来诱导肿瘤细胞的趋化运动。其中PKCζ是一个关键性的信号分子。但目前肿瘤细胞趋化运动过程中调控PKCζ激活及其激活下游通路的详细机制并不清楚。在本项目中我们将结合新型的DiLeu稳定同位素定量标记法与二维一体纳流高效液相色谱在线分离技术建立研究细胞内信号传导通路动态变化的新型质谱分析方法。并以此为基础系统性地研究PKCζ相互作用蛋白分子在趋化运动中的动态表达，以确立调控趋化运动的信号分子网络模型。同时，我们将采用已建立的趋化运动实验方法从细胞生物学的角度对寻找到的新型蛋白进行功能确认。该项目研究将进一步揭示肿瘤细胞趋化运动的信号传导分子机制，并为筛选新型药物靶点与发展治疗癌症转移的特效药物提供重要依据。

中文关键词： 质谱分析；定量蛋白质组学；肿瘤转移；趋化运动；信号传导

英文摘要： Tumor metastasis is the major death cause in cancer patients, and currently there's no efficient medication to control such process. Chemotaxis, the directional movement of cell in response to a chemical gradient, plays an important role in tumor metastasis. In our previous study, we discovered protein kinase C ζ (PKCζ) mediates chemotaxis by regulating cytoskeleton rearrangement and cell adhesion through the PDK1/AKT2/PKCζ pathway. Our ongoing research suggests PKCζ plays such role by interacting with many other signaling molecules; however their identities remain unknown. In this study we will use novel DiLeu isobaric labeling quantification method and biphasic HPLC separation to establish an efficient analysis system to investigate the dynamic change of the signaling molecular network involved with cancer cell chemotaxis using PKCζ as bait. And their functions will be further studied using cell chemtaxis assay. This study will reveal the molecular mechanism regulating tumor cell chemotaxis, and provide theoretical basis for developing novel medication to control tumor metastasis.

英文关键词： mass spectrometry；quantitative proteomoics；metastasis；chemotaxis；signaling pathway