TRPC6在VEGF调节新生血管形成中的作用及机制

项目名称： TRPC6在VEGF调节新生血管形成中的作用及机制

项目编号： No.30872989

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2009

项目学科： 轻工业、手工业

项目作者： 葛瑞良

作者单位： 中国人民解放军第二军医大学

项目金额： 30万元

中文摘要： 血管生成在肿瘤的形成与转移中起到重要作用，通过干扰血管形成抗肿瘤已在临床治疗取得巨大成功。钙离子在VEGF刺激新生血管形成信号传导中起到了重要的作用，但其过程中钙离子水平具体调控机制仍未完全明确。TRPC是一种新发现的非选择性钙离子通道, 本研究根据预实验结果,提出TRPC6参与VEGF信号传导调节血管形成这一假设。用TRPC通道抑制剂和siRNA、显性抑制技术干扰该通道蛋白的表达和功能，观察TRPC6被抑制前后人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）内钙离子水平的变化，细胞体外增殖、成管能力的改变，以及鸡胚尿囊膜新生血管形成的差异。结果发现：TRPC6通道存在于血管内皮细胞中，应用SKF-96365和siRNA方法阻滞TRPC6的通道功能后，HUVEC细胞的增殖被明显抑制，胞内游离钙离子浓度降低，细胞被阻滞在G2/M期，同时细胞的成管能力减弱。鸡胚尿囊膜实验证明TRPC通道被阻滞后，VEGF引起的新生血管形成作用减弱。本研究探索了抗肿瘤新生血管形成治疗新的细胞膜上靶点，同时也拓展了TRPC通道的研究领域。

中文关键词： TRPC6;新生血管形成;VEGF;增殖

英文摘要： Angiogenesis is important for development, tumor growth and metastasis. Intracellular Ca2+ and its signaling play critical roles in VEGF-mediated angiogenesis. Transient receptor potential canonical (TRPC) channel 6, a Ca2+-permeable nonselective cation channel, can be activated by VEGF. However, whether TRPC6 mediates the effect of VEGF on angiogenesis is unknown. Here, we report that TRPC6 is important for VEGF-mediated angiogenesis. Using human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) as a cell model, we found that pharmacological blockade of TRPCs inhibited the VEGF-induced intracellular Ca2+ elevation, suppressed the proliferation and tube formation of HUVECs. Inhibition of TRPC6 by a dominant negative mutant of TRPC6 and lentivirus-based RNAi arrested HUVECs at G2/M phase and greatly suppressed the VEGF-induced HUVEC proliferation and tube formation. Finally, inhibition of TRPCs abolished the VEGF-, but not FGF-, induced angiogenesis in the chick embryo chorioallantoicmembrane. These results suggest that TRPC6 plays an important role in VEGF-mediated angiogenesis.

英文关键词： TRPC6 ; angiogenesis; VEGF; proliferation