大肠杆菌表达异源蛋白质时的多态性研究

项目名称： 大肠杆菌表达异源蛋白质时的多态性研究

项目编号： No.31400041

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2014

项目学科： 生物科学

项目作者： 赵云

作者单位： 中国科学院生物物理研究所

项目金额： 24万元

中文摘要： 由于蛋白质自身折叠及细胞生理状态等原因，异源蛋白在大肠杆菌中表达时往往会形成包涵体等无活性状态。传统对包涵体的研究往往是基于群体水平,无法在单细胞水平上跟踪异源蛋白的折叠过程。我们利用流式细胞仪等手段首次发现大肠杆菌在表达异源蛋白时具有多态性。影响包涵体形成的相关因素正是通过改变多态性分布从而引起异源蛋白可溶性的改变。在本研究中，我们将采用新一代更高精确度和灵敏度的流式细胞仪Influx对大肠杆菌在表达异源蛋白质时产生多态性的生物学机理进行进一步研究。我们的研究包括：（1）获取各种培养条件对细胞亚群多状态分布影响的系统信息；（2）比较高活性细胞群和低活性细胞群的目标蛋白表达水平、包涵体形成状态和基因表达谱；（3）筛选获得能够利于异源蛋白高表达及正确折叠并具有稳定表型的突变菌株；（4）对大肠杆菌表达其它模式蛋白质时的多态性进行分析。以上研究结果将为蛋白质细胞内折叠机理提供新的依据。

中文关键词： 异质性；流式细胞仪；大肠杆菌；β-半乳糖苷酶；

英文摘要： The process and mechanism of in vivo peptide folding is a central topic of biological research. Heterogeneous protein folding and inclusion body formation in bacteria is of particular interest due to its importance in application in bio-industry and basic

英文关键词： Heterogeneity；Flow cytometry；E.coli；？β-galactosidase；