利用宏基因组文库和微生物菌种库构建高效转化制备L-DOPA的酪氨酸酶体系

项目名称： 利用宏基因组文库和微生物菌种库构建高效转化制备L-DOPA的酪氨酸酶体系

项目编号： No.81102362

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2012

项目学科： 生物科学

项目作者： 何文妮

作者单位： 中国科学院微生物研究所

项目金额： 14万元

中文摘要： L-DOPA是用于治疗帕金森症最有效的药物，目前全球每年消耗约 408吨并且复合增长率达到年均13%，工业化生产中现有的化学合成法和酪氨酸酚裂解酶合成法无法满足这一需求，因此寻找更高效的生产方法是现今的热点之一。多年研究发现，运用酪氨酸酶转化制备L-DOPA是最具潜力的途径，其特点是以L-酪氨酸为底物，反应简单，且酪氨酸酶来源丰富。本项目拟从课题组已建立的微生物菌种库和宏基因组文库出发，运用高通量筛选获得高酪氨酸酶活性菌株和阳性克隆，而后采用以下三种方法构建高效转化体系：1高酪氨酸酶活性菌株直接作为酶供体参与反应；2 通过异源表达大量获得酪氨酸酶，并运用固定化等方法稳定酶的活性；3 将阳性克隆片段与简化基因组的E.coli结合构建"细胞工厂"，既保留该酶的高催化效力又具有E.coli生长迅速的特点。最终通过比较这三种方法，优化反应条件，确立最高效酪氨酸酶转化体系，大幅提高L-DOPA产量。

中文关键词： L-dopa；酪氨酸酶；宏基因组文库；高通量筛选；

英文摘要：

英文关键词： L-dopa；tyrosinase；metagenomic library；high-throughput screening；