象耳豆根结线虫生防微生物功能基因挖掘及作用机理研究

项目名称： 象耳豆根结线虫生防微生物功能基因挖掘及作用机理研究

项目编号： No.31360432

项目类型： 地区科学基金项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 农业科学

项目作者： 陈绵才

作者单位： 海南省农业科学院

项目金额： 55万元

中文摘要： 避开传统分离、纯化培养的技术手段，构建和筛选根际土壤微生物宏基因组文库，获取对象耳豆根结线虫有生物活性的、新型的蛋白酶基因并研究其作用机制。以脱脂奶为底物，功能驱动筛选蛋白酶基因，并以象耳豆根结线虫为靶标，进一步筛选对其有活性的蛋白酶基因；构建和筛选亚克隆，通过序列分析，获得活性蛋白酶基因核苷酸序列并预测氨基酸结构；在大肠杆菌中克隆并原核表达目的基因；利用柱层析、高效液相色谱、室内活性跟踪和生物质谱，分离、纯化并鉴定活性蛋白；解析蛋白结构和功能，并测定酶活、其它理化性质和杀线活性，通过电镜观察，研究其对象耳豆根结线虫的作用机制。

中文关键词： 象耳豆根结线虫；根际微生物；宏基因组Fosmid文库；蛋白酶基因；基因筛选

英文摘要： In order to avoid the traditional technology of separation and purification,metagenomic libraries were constructed using total genomic DNA extracted from rhizosphere microorganisms in Hainan and were used together with a fosmid vector,pCC1FOS.Active clone

英文关键词： Meloidogyne enterolobii；Rhizosphere microorganisms；Metagenomic Fosmid library；protease genes；Gene screening