人博卡病毒1型与分化的人气道上皮细胞膜蛋白的相互作用研究

项目名称： 人博卡病毒1型与分化的人气道上皮细胞膜蛋白的相互作用研究

项目编号： No.31500143

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2016

项目学科： 生物科学

项目作者： 刘文宽

作者单位： 广州医科大学

项目金额： 20万元

中文摘要： 人博卡病毒1型（HBoV1）是全球流行的重要呼吸道病原体，其感染机制目前仍不清晰。前期我们通过HBoV1广州株（GU338055）结合HBoV1-Salvador1(JQ923422)的５’末端LEH及３’末端REH建立了HBoV1嵌合病毒反向遗传系统并拯救得到HBoV1病毒粒子。为了解病毒感染敏感细胞即分化的人气道上皮细胞过程中，病毒与细胞膜蛋白的相互作用，本研究拟通过细胞膜蛋白提取、免疫共沉淀、蛋白质组学技术，结合病毒在不同细胞的感染特性，建立敏感细胞与病毒粒子相互作用的膜蛋白谱；通过评价候选膜蛋白在病毒敏感/非敏感细胞中的表达水平、膜蛋白抗体在病毒敏感细胞中的抗感染保护作用、膜蛋白基因在病毒非敏感细胞中瞬时表达后感染能否建立，初步探讨候选膜蛋白分子在HBoV1感染细胞过程中的作用。本项目的成功实施将为HBoV1感染机制、治疗靶点和疫苗的研究提供重要参考。

中文关键词： 人博卡病毒1型；人气道上皮细胞；膜蛋白；蛋白相互作用；蛋白质组学

英文摘要： Human bocavirus 1 (HBoV1) is an important respiratory pathogen infection in human being worldwide; however, the infection mechanism of HBoV1 is still not clear at present. We have established the reverse genetics system of a chimeric-HBoV1 and rescued virus particles by combining HBoV1 from Guangzhou (GU338055) and left-end hairpin(LEH) & right-end hairpin (REH) of HBoV1-Salvador1(JQ923422) in previous work. To understand the interaction relationship between HBoV1 and cell membrane protein of HBoV1-sensitive cell-differentiated human airway epithelial cell in infection, we will establish the membrane protein atlas which has interaction between virus particle and HBoV1-sensitive cell by membrane protein extraction, co-immunoprecipitation, proteomics and taking the infection characteristics of virus in different cells into consideration. Then, we will evaluate the function of the candidate membrane protein in virus infection preliminarily by studying the protein expression level in HBoV1-sensitive/non-sensitive cells, the protecting function of candidate membrane protein antibody in HBoV1-sensitive cell and the virus sensitivity of HBoV1-non-sensitive cell which candidate membrane protein gene transient expressed. The successful implementation of this project will provide important information for further studying in HBoV1 infection mechanism, therapeutic targets and vaccines.

英文关键词： human bocavirus 1;human airway epithelial cell;membrane protein;protein interaction;proteomics