高盐极端环境微生物Na+/H+逆向转运蛋白基因的克隆与功能研究

项目名称： 高盐极端环境微生物Na+/H+逆向转运蛋白基因的克隆与功能研究

项目编号： No.30960009

项目类型： 地区科学基金项目

立项/批准年度： 2010

项目学科： 轻工业、手工业

项目作者： 杨礼富

作者单位： 中国热带农业科学院

项目金额： 23万元

中文摘要： Na+/H+逆向转运蛋白对高盐极端环境微生物的环境适应起着十分重要的作用。本项目提取和纯化盐湖沉积土样的微生物宏基因组DNA，通过功能驱动筛选策略和序列分析，获得若干Na+/H+逆向转运蛋白基因。选择其中1个基因，通过亚克隆构建仅携带单一目的基因的重组子；测定重组子在不同NaCl、LiCl浓度和不同pH条件下的生长能力差异；利用荧光分光光度计测定由重组子制备的翻转膜中Na+(Li+、K+)/H+逆向转运蛋白的活性、翻转膜在不同pH下转运Na+、Li+、K+等单价阳离子的活性变化趋势，以及对单价阳离子的表观Km和Vmax；对目的基因中若干编码跨膜区保守氨基酸残基的核苷酸进行定点突变，并对突变体进行功能特性研究。本项目对挖掘新的微生物Na+/H+逆向转运蛋白基因资源以及深入揭示高盐极端微生物的环境适应机制等具有重要意义。

中文关键词： 高盐极端环境微生物；Na+/H+逆向转运蛋白基因；翻转膜；定点突变；

英文摘要：

英文关键词： extreme halophilies；Na+/H+ antiporter；everted membrane vesicles；site-directed mutagenesis；