TRPC1蛋白分子参与中性粒细胞极性化的作用机制

项目名称： TRPC1蛋白分子参与中性粒细胞极性化的作用机制

项目编号： No.30800438

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2009

项目学科： 医药、卫生

项目作者： 孟晓静

作者单位： 南方医科大学

项目金额： 19万元

中文摘要： 中性粒细胞（PMNs）极性化功能是抗感染过程中具有趋化功能的重要生理基础，调节PMNs极性化功能有利于阻断多种感染性疾病的病理过程，但对极性分子的信号调节和时空分布的机制缺乏足够认识。本课题研究了参与钙池操纵的钙离子进入的重要分子TRPC1易位于脂筏（LRD）上并与磷脂酰肌醇相互作用在中性粒极性化中的作用。结果表明, PMNs性化时，TRPC1分子呈极性化分布，TRPC1通道电流增大；TRPC1分子的抑制剂可显著性抑制PMNs极性化率，降低Rac2的活性；PMNs发生极性化时，TRPC1易位于LRD呈共定位，破坏LRD后，PMNs极性化呈显著性下降，并破坏聚合的F-actin的极性化分布，外钙内流也呈显著性降低，用胆固醇恢复LRD结构后，得以恢复；另外，用STIM1抗体抑制PMNs 的STIM1分子功能后，出现与破坏LRD相似的结果；在dHL-60细胞中共转染CFP-TRPC1质粒和YFP-PH-AKT质粒进行fMLP刺激，有微弱荧光共振能量传递。说明PMNs发生极性化时，TRPC1易位至LRD并和其上的磷脂酰肌醇发生相互作用，揭示了PMNs在炎性刺激因子的作用下发生极性化的机制。

中文关键词： 中性粒细胞；极性化； TRPC；磷脂酰肌醇；脂筏

英文摘要： Neutrophil polarization and chemotaxis are critical for the inflammatory response. Neutrophil chemotaxis requires the temporal and spatial regulation of intracellular signaling pathways allowing the neutrophil to detect a gradient of attractant, polarize, and migrate rapidly toward the chemotactic source. however, the signaling mechanisms that regulate neutrophil polarization during chemotaxis have not been clearly defined. TRPC1 redistributed to the lipid raft domains(LRD), and TRPC1 current increased during neutrophil polarization. Disruption of LRD could decrease neutrophil polarization, Rac2 activation, the distribution of F-actin polymerization, which could be restored by cholesterol. Using STIM1 neutralizing mAb approaches, we found that neutrophils polarization was also decreased. Transfection of CFP-TRPC1 and YFP-PH-AKT into dHL-60 cells resulted in fluorescence resonance energy transfer. These data have implied that TRPC1 channel could be associated with LRD during neutrophils polarization.

英文关键词： neutrophil; polarization; c-type transient receptor potential; phosphatidylinositol; lipid raft