在斑马鱼胚胎上建立基因打靶技术的研究

项目名称： 在斑马鱼胚胎上建立基因打靶技术的研究

项目编号： No.31171434

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2012

项目学科： 生物科学

项目作者： 赵庆顺

作者单位： 南京大学

项目金额： 60万元

中文摘要： 斑马鱼是一种广泛应用于发育、遗传及疾病模型创建等研究领域的重要模式动物。新近建立的锌指核酸酶（ZFN）技术虽可定向突变特定基因，但还不能在指定的基因座上精确地进行点突变、缺失、插入及条件性敲除等改造，因此在斑马鱼上建立基因打靶技术十分必要。基因打靶是一项利用同源重组原理定向改造内源基因的遗传学技术，依赖于动物胚胎干细胞系的建立。由于在斑马鱼上一直无法建立胚胎干细胞系，本研究将直接以斑马鱼胚胎细胞为操作对象。已知ZFN对基因组的切割可导致切割点附件的同源重组效率提高多个数量级，因此本申请将重点开展在斑马鱼胚胎上建立基于ZFN协助的基因打靶技术的研究，实现在斑马鱼特定基因上进行点突变、缺失、插入及条件性敲除等改造。此外，我们还将对在斑马鱼胚胎上建立不依赖于ZFN的基因打靶技术进行探索性研究，以绕开ZFN技术瓶颈。实现我们的预期研究目标，将会为利用斑马鱼开展的相关研究提供强有力的技术手段。

中文关键词： 斑马鱼；基因打靶；人工核酸酶；同源重组；条件性敲除

英文摘要：

英文关键词： Zebrafish；Gene targeting；Enginerred endonuclease；Homologous recombination；Conditional knock out