植物蛋白泛素化动态修饰的定量分析

项目名称： 植物蛋白泛素化动态修饰的定量分析

项目编号： No.31170781

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2012

项目学科： 生物物理、生化与生物分子学、生物力学与组织工程

项目作者： 杨小元

作者单位： 中国科学院遗传与发育生物学研究所

项目金额： 65万元

中文摘要： 泛素化修饰介导的蛋白降解机制是真核生物中普遍存在的调控机制。本项目是关于植物泛素化修饰动态的蛋白质组水平的研究。根据国内外在这一领域的研究进展，尤其是植物领域泛素化蛋白纯化效率不够高，缺乏定量分析的现状，确定了研究内容。研究工作旨在建立高效的泛素化蛋白纯化系统，规模化的鉴定拟南芥中的泛素化蛋白底物在特定条件下的变化。采用两种方法：一种是表达Biotin-UBQ的转基因拟南芥，用avidin-resin亲和层析进行纯化；另一种是表达串联的泛素结合结构域的蛋白，对泛素化底物进行纯化。在此基础上建立定量的分析植物在响应逆境胁迫时泛素化水平发生变化的蛋白分析系统。同时结合稳定性同位素标记的方法进行定量分析：一种是用稳定性同位素标记的氨基酸对植物进行标记，另一种是用15N进行标记。通过研究初步探索泛素化修饰和其它翻译后修饰之间的关系，建立全面了解高等植物的泛素介导的蛋白降解的分析系统。

中文关键词： 泛素化修饰；蛋白质组；定量分析；拟南芥；15N

英文摘要：

英文关键词： ubiquitylation；proteomics；quantitative analysis；Arabidopsis；15N