智能磷酸转移酶的分子酶工程技术及其应用基础研究

项目名称： 智能磷酸转移酶的分子酶工程技术及其应用基础研究

项目编号： No.20836004

项目类型： 重点项目

立项/批准年度： 2009

项目学科： 金属学与金属工艺

项目作者： 邢新会

作者单位： 清华大学

项目金额： 180万元

中文摘要： 智能酶是本项目小组在前期研究的基础上提出的概念，指的是通过蛋白的分子操作产生的具有快速监测和过程控制功能的酶，为实现酶的生产、分离纯化及催化过程的智能化控制和集成提供了重要思路。本项目以拥有的产气肠杆菌新型磷酸酶(PHO)为研究对象，在系统解析PHO的酶学特性的基础上，克隆分析PHO的全基因序列，通过分子改造，提高PHO特异转移磷酸的催化能力；分别构建PHO与麦芽糖结合蛋白(MBP)的两重融合蛋白、PHO与MBP和绿色荧光蛋白(GFP)三重融合蛋白的高效表达体系，利用GFP荧光的快速检测特点，建立融合蛋白的生产和催化过程的智能监控体系；建立定量表征MBP与不同状态麦芽糖和淀粉分子间相互作用的方法，利用MBP亲合吸附的基础数据，建立亲合吸附磁性纳米颗粒的规模化制备工艺；实现融合蛋白的分离和固定化一体化集成技术，构建固定化酶反应器，为智能磷酸酶催化生产呈味核苷酸技术的工业应用提供技术基础。

中文关键词： 融合酶；连接肽；绿色荧光蛋白；磁性纳米颗粒；生物催化

英文摘要：

英文关键词： fusion enzym；linker；GFP；magnetic nanoparticle；biocatalysis