猪链球菌噬菌体裂解酶的功能域解析及基于三维结构的底物识别机制研究

项目名称： 猪链球菌噬菌体裂解酶的功能域解析及基于三维结构的底物识别机制研究

项目编号： No.31372500

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 农业科学

项目作者： 孙建和

作者单位： 上海交通大学

项目金额： 85万元

中文摘要： 猪链球菌2型是重要的人兽共患病原菌，临床菌株多呈严重耐药和多重耐药，应用抗生素治疗面临挑战。猪链球菌2型噬菌体编码的裂解酶LySMP因呈现高效裂菌活性而具有抗菌应用潜力，但其介导裂菌的酶学基础和裂菌机制尚不清楚。本项目将聚焦LySMP的功能域解析和底物识别机制研究：通过生物信息学、定位突变和负离子质谱分析，解析LySMP的催化域和结合域，揭示酶活性中心、酶切作用靶点；应用免疫共沉淀和质谱分析，发掘猪链球菌细胞壁上的LySMP结合域受体；利用等温滴定量热法（ITC)和表面等离子共振（SPR）技术，测定LySMP的底物结合常数和催化效率，阐明酶学特征。采用蛋白质结晶、X射线衍射和同源建模解析裂解酶的三维结构，并基于核磁共振技术重建猪链球菌肽聚糖的三维结构，进而揭示裂解酶-肽聚糖复合物的动态三维结构特征，最终阐明LySMP的底物识别和裂解机制，为研制防控猪链球菌病的高效裂解酶奠定理论和应用基础。

中文关键词： 猪链球菌；噬菌体；裂解酶；三维结构；功能域

英文摘要： Streptococcus suis serotype 2 (SS2) is an important zoonotic pathogen, and the increasing prevalence of antibiotics resistant SS2 strains becomes one of the greatest challenges worldwide. LySMP, a peptidoglycan hydrolase （lysin） encoded by SS2 bacteriopha

英文关键词： streptococcus suis；bacteriophage；lysin；3D structure；domain