尿沉淀细胞DNA甲基化高通量检测方法的研究

项目名称： 尿沉淀细胞DNA甲基化高通量检测方法的研究

项目编号： No.60901053

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2010

项目学科： 化学工业

项目作者： 张定东

作者单位： 金陵科技学院

项目金额： 20万元

中文摘要： 设计一组选择探针，每个选择探针的两末端序列与靶DNA两末端特异互补，选择探针的中间序列与通用序列互补。基因组DNA经酶切磁珠富集后产生的高甲基化CpG岛片断与选择探针，通用序列等混在一起，经过杂交、外切、连接成环、Cy3荧光标记的通用引物扩增等步骤，完成对靶序列的选择性多重扩增。丙烯酰胺修饰的甲基化检测探针混合到含有丙烯酰胺单体、丙三醇、过硫酸铵的溶液里，然后点到丙烯基团修饰的玻片上，通过TEMED完成聚合，从而制备成多基因甲基化检测的三维凝胶芯片。芯片与荧光标记的多基因靶DNA杂交后，通过凝胶芯片电泳，去除掉非特异性吸附与杂交，最后通过荧光信号的有无进行甲基化状态的判读。这种选择性扩增结合三维凝胶电泳芯片技术具有固定量大、敏感性高、特异性强、可电泳、多基因并行分析等优点。可用于尿沉淀细胞DNA甲基化高通量检测，为膀胱癌肿瘤标志物的筛选，风险筛查，预后评估等提供了新的检测方法与手段。

中文关键词： DNA 甲基化；miRNA；高通量；检测；标记

英文摘要：

英文关键词： DNA methylation；miRNA；high-throughput；detection；marker