α-酮己二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶的定向进化研究

项目名称： α-酮己二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶的定向进化研究

项目编号： No.31360213

项目类型： 地区科学基金项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 生物科学

项目作者： 谭强

作者单位： 广西中医药大学

项目金额： 45万元

中文摘要： "三酶一步法"制备7-氨基头孢烷酸（7-ACA）因避免了反应体系中存在过氧化氢而降低酶催化剂的使用寿命、造成生产成本提高等问题，将成为国际研究新热点。高活力α-酮己二酰-7-氨基头孢烷酸（AKA-7-ACA）酰化酶的获得是解决"三酶一步法"实现工业化生产7-ACA的一个瓶颈。本项目拟对假单胞菌来源的AKA-7-ACA酰化酶分子结构进行研究，运用基因重组技术对酶活性中心氨基酸序列进行基因体外定向进化，构建重组大肠杆菌E.coli JM105，通过制备AKA-7-ACA结构类似物，以蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus ATCC 13061作为指示菌，设计一个AKA-7-ACA酰化酶的高通量筛选系统，从定向进化获得的突变文库中，筛选出高活力的AKA-7-ACA酰化酶产生菌。本项目研究对进一步降低7-ACA生产成本、提高其国际竞争力具有重要的理论指导与现实意义。

中文关键词： 三酶一步法；7-氨基头孢烷酸；定向进化；分子对接；α-酮己二酰-7-氨基头孢烷酸

英文摘要： Single-pot conversion of cephalosporin C to 7-aminocephalosporanic acid (7-ACA) in absence of hydrogen peroxide could be carried out by a tri-enzymatic system, which would be the new focus of international research. In this tri-enzymatic system, the opera

英文关键词： Tri-enzymatic system；7-Aminocephalosporanic acid；Directed evolution；Molecular docking；α-Ketoadipyl-7-aminocephalosporanic acid