一种可与DNA-shuffling对接的宏基因组同源基因群钓取方法的构建

项目名称： 一种可与DNA-shuffling对接的宏基因组同源基因群钓取方法的构建

项目编号： No.30900253

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2010

项目学科： 金属学与金属工艺

项目作者： 王秋岩

作者单位： 杭州师范大学

项目金额： 20万元

中文摘要： 在定向进化中，尽管采用体外同源基因重组即DNA改组技术(DNA-shuffling)的方法更容易获得进化蛋白，但是受已知同源基因数量的限制，该方法的应用受到极大限制。本项目拟采用RecA同源基因钓取方法，使用前期宏基因组内扩增得到的一定数量的脂肪酶核心片段，以这些片段为探针，从宏基因组中钓取同源基因全长，再以获得的同源基因全长为探针，循环钓取大量脂肪酶同源基因，后继进行DNA-shuffling，以脂肪酶对长链酯底物活力为模型，通过活力筛选进行体外蛋白进化，验证本方法提供的同源基因群，可以方便的用作为DNA-shuffling的原材料。本项目与同样基于重组原理的分子体外改造DNA-shuffling技术，可实现匹配的对接，达到高效进化蛋白的目的，促进DNA-shuffling方法的应用。同时，能够实现大量同源蛋白基因的便捷获取，拓展研究工作者对同源蛋白家族的探索空间。

中文关键词： 宏基因组学；定向进化；酯酶；；

英文摘要：

英文关键词： Metagenomic；Directed Evolution；Esterase；；