蛋白质硝基化修饰在机械创伤致心肌细胞凋亡中的作用

项目名称： 蛋白质硝基化修饰在机械创伤致心肌细胞凋亡中的作用

项目编号： No.30872680

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2009

项目学科： 轻工业、手工业

项目作者： 梁峰

作者单位： 山西医科大学

项目金额： 34万元

中文摘要： 机械创伤能够导致继发性心肌损伤，但机制不清。我们前期研究表明，机体遭受机械创伤时，心肌组织可以发生时间依赖性的心肌细胞凋亡，并且心肌组织中蛋白质硝基化水平升高。本研究运用TUNEL、DNAladder形成和微量酶活性检测技术等方法观察机械创伤时心肌细胞凋亡发生的特点及主要信号转导途径；通过给予广谱caspase抑制剂（z-VAD-fmk）观察心肌细胞凋亡在机械创伤动物心功能损伤中的作用；运用免疫组化、免疫印迹、ELISA等方法观察机械创伤过程中，心肌组织中NO及其衍生物（RNS）含量和蛋白质硝基化水平变化；通过外源性给予一氧化氮合酶（NOS）阻断剂、ONOO-清除剂和髓过氧化物酶（MPO）抑制剂观察RNS的分子来源，并探讨蛋白质硝基化水平与心肌细胞凋亡的关系，拟揭示蛋白质硝基化参与机械创伤致心肌细胞凋亡的机制。

中文关键词： 心肌；机械创伤；细胞凋亡；蛋白质硝基化

英文摘要： Mechanical trauma can lead to secondary myocardial injury, but the mechanisms remain unknown. Our previous studies showed that cardiomyocyte apoptosis in a time-dependent manner occurred in myocardial tissues of the rats subjected to mechanical trauma, and protein nitration levels in myocardial tissues obviously increased. Our current study was aimed to: (1) investigate the characteristics and signal transduction pathways of cardiomyocyte apoptosis induced by mechanical trauma using TUNEL stain, DNA ladder formation and caspase activity assay; (2) elaborate the role of cardiomyocyte apoptosis in trauma-caused cardiac dysfunction by treatment with z-VAD-fmk (a broad-spectrum caspase inhibitor); (3) detect the change of nitric oxide, reactive nitrogen species (RNS) and protein nitration levels in myocardial tissues of the traumatic rats by immunohistochemistry, western-blot, and ELISA methods; (4) observe the source of RNS and explore the relationship between protein nitration and cardiomyocyte apoptosis by exogenous administration of nitric oxide synthase blockers, ONOO- scavenger and myeloperoxidase inhibitor, and further reveal the possible mechanisms of protein nitration involved in trauma-induced cardiomyocyte apoptosis.

英文关键词： myocardium; mechanical trauma; apoptosis; protein nitration