基于磁分离技术的miRNA靶基因鉴定的新方法研究

项目名称： 基于磁分离技术的miRNA靶基因鉴定的新方法研究

项目编号： No.31400730

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2014

项目学科： 生物科学

项目作者： 刘颖勋

作者单位： 西安交通大学

项目金额： 24万元

中文摘要： 微RNA（miRNA）通过在转录后水平上影响其靶基因的表达，参与细胞内多种重要生理过程的调控。鉴定miRNA的靶基因及其调控网络已成为生物医学领域的研究热点。常规的miRNA靶基因检测方法通量低而RNA测序方法得到的数据又缺乏特异性。利用氧化铁磁性纳米颗粒（MNP）的磁分离特性，本项目发展了一种具有特异性且高通量的miRNA靶基因鉴定的新技术。通过构建AGO2蛋白抗体包被的磁性纳米颗粒，提高RNA诱导的沉默复合物（RISC）的免疫沉淀效率。在RNA连接酶作用下，对装配入RISC的miRNA及其配对的靶向序列进行连接，利用带有反义序列的捕获探针的磁性纳米颗粒对待测miRNA与其靶向序列形成的杂合体进行纯化，以期为后续的RNA测序构建高度特异性的核酸文库。同时，运用该系统高效地绘制与肝肿瘤增殖、侵袭和转移密切相关的miR-302b的靶基因谱，并以此为指导，揭示miRNA操控肿瘤发生的分子机理。

中文关键词： 磁性纳米颗粒；MeCP2；甲基化测序；APPL1；胃癌细胞

英文摘要： MicroRNAs (miRNAs) play key roles in a variety of important physiological processes by regulating target genes in the post-transcriptional level. The identification of specific mRNAs that target a given miRNA is essential for studies in gene regulation, b

英文关键词： Magnetic nanoparticles；MeCP2；MBD-seq；APPL1；gastric cancer