一种新的Kunitz型蜘蛛多肽的分子改造、表达与生物活性研究

项目名称： 一种新的Kunitz型蜘蛛多肽的分子改造、表达与生物活性研究

项目编号： No.30901874

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2010

项目学科： 生物科学

项目作者： 蒋立平

作者单位： 中南大学

项目金额： 21万元

中文摘要： 蜘蛛毒液是一个具有多种生物学活性的巨大的药物资源库，但是从天然的毒液中分离纯化和利用化学法合成蜘蛛多肽都很难满足目前的研究和开发利用的需要，而利用基因工程表达是获得蜘蛛多肽的一种有效手段。我们利用生物信息学分析新基因HW11c40所编码的Kunitz型蜘蛛多肽，发现它是具有极强的胰蛋白酶抑制活性和较低的钾离子通道阻断活性。为了证实我们的推测和创制活性专一的胰蛋白酶抑制剂，首先，拟利用PCR定点突变来改造该基因和通过酿酒酵母表达系统来表达该基因及突变体；然后，利用离子交换、反相HPLC和质谱技术来分离、纯化和鉴定它们的表达产物；最后，利用等温滴定量热法等生物动力学与生物热力学方法以及膜片钳和电压钳等电生理技术，对表达产物的胰蛋白酶抑制活性和钾离子通道阻断活性分别进行测定。本项目的顺利实施为创制具有完全自主知识产权的高效的胰蛋白酶抑制剂提供新途径，为治疗急性胰腺炎等疾病提供新型候选药物分子。

中文关键词： Kunitz型多肽；胰蛋白酶抑制剂；分子改造；基因表达；蜘蛛毒素

英文摘要：

英文关键词： Kunitz-type peptides；Trypsin inhibitors；Molecular modification；Gene expression；Spider toxins