探索胶质瘤免疫治疗 301医院利用GBM外泌体构建DC疫苗

论文作者：刘鸿宇*，陈凌*，刘嘉霖*，孟恒星，张嵘，马林，吴亮亮，于松岩，时飞，李颖，张丽君，王玲兄，冯世宇，张琪，彭耀军，吴其艳，刘纯希，常鑫，杨霖，植村靖史，余新光（通讯作者），刘天懿（通讯作者）

该研究在国际上首次利用GBM来源外泌体和活化iNKT细胞佐剂联合致敏DC疫苗进行动物实验，在GBM大鼠原位肿瘤模型的治疗中表现出显著效果，属于探索性、前瞻性研究，为即将开展的多中心、大样本临床试验积累了证据。

GBM因复发率高，生存期短的临床特点，其标准治疗方案是手术后辅以同步放化疗继而标准化疗，但疗效改善并不显著。癌症免疫疗法是一个重要而有前景的发展方向，DC疫苗可以通过递呈肿瘤抗原刺激机体自身免疫系统，诱导患者主动免疫，增强特异性免疫应答从而杀伤肿瘤细胞。虽然免疫治疗在部分恶性实体肿瘤中初见成效，但GBM免疫治疗发展仍然面临艰难挑战。

目前，解放军总医院神经外科肿瘤免疫治疗相关研究已整体布局、全面铺开，神经外科与肿瘤中心组成的神经肿瘤免疫治疗研究团队在GBM免疫治疗方面已取得初步成果。

DC参与细胞介导的免疫反应，是目前已知体内最强的抗原递呈细胞，通过递呈肿瘤相关抗原（TAA）和共刺激信号，活化肿瘤特异性淋巴细胞，从而激发体内强效免疫应答反应，杀伤肿瘤细胞。

图1 诱导大鼠DC形成。（A）诱导培养3天后，细胞成簇状增殖。（B）第9天DC呈现树突状突起形态特征。

图2 大鼠C6细胞株来源外泌体鉴定。（A）透射电子显微镜下的形态。（B）外泌体与肿瘤细胞裂解物的免疫蛋白印迹分析。

国际上已报道的DC疫苗治疗GBM研究中，GBM患者生存获益并不稳定。该研究创新性采用外泌体（exosome）致敏DC，因其含有与来源细胞相关的蛋白质和核酸，也包括肿瘤相关抗原，较肿瘤细胞裂解物，能更有效致敏DC，增强抗肿瘤免疫应答。同时采用DC递呈的特定糖脂质抗原（α-GalCer）活化、扩增体内自然杀伤T（iNKT）细胞。iNKT细胞不仅具有直接抗肿瘤作用，而且作为细胞佐剂，通过与DC相互作用促进DC 抗原递呈功能，产生大量细胞因子，改善癌周微环境的免疫抑制。

在GBM大鼠模型生存分析中，与对照组及肿瘤细胞裂解物组相比，外泌体联合糖脂质致敏DC治疗组中位生存期显著延长，肿瘤细胞接种27天后存活率达到了90%。

接种C6细胞后第3、7、14、21、35天的MRI扫描观察。外泌体联合糖脂质致敏DC治疗组肿瘤生长速度较其他组慢，且第21天时在轴位3DFSPGR增强图像上可以看到中心大部分肿瘤组织坏死。且有部分肿瘤模型第35天时轴位3DFSPGR增强图像上已看不到明显肿瘤生长。

外泌体联合糖脂质致敏DC治疗组免疫组化分析，表现出更多CD8+和CD3+T淋巴细胞浸润。

外泌体联合糖脂质致敏DC治疗组血清中IFN-γ,IL-12p70,IL-4, IL-13, TNF-α水平明显升高，IL-10和IL-17A水平明显降低。提示肿瘤细胞来源外泌体联合糖脂质致敏DC疫苗可以通过调节免疫刺激因子和免疫抑制因子释放，有效改善GBM免疫微环境，解除免疫抑制。

结论：肿瘤细胞来源外泌体作为一种更有效的新抗原，与iNKT细胞佐剂协同作用，改善癌周微环境免疫抑制，诱导DC介导的强效抗原特异性抗肿瘤免疫应答。肿瘤来源外泌体联合糖脂质致敏DC疫苗为GBM免疫治疗提供新的策略。

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