西班牙在去年3月废水样本中检出新冠病毒，这个研究靠谱吗？

6月26日， 西班牙巴塞罗那大学 发布公告称，该校领导的一个研究小组在 2019年3月采集的巴塞罗那废水样本中 检测出新冠病毒。

这项新研究结果挑战了目前关于新冠病毒起源和时间的共识。 公告出来后，在业内引起了巨大争议，也吸引了世界各大媒体的广泛关注。

公告称，巴塞罗那大学肠道病毒小组的研究人员对当地废水样本做了检测，结果发现在2019年3月12日采集的废水中已有新冠病毒的踪迹，此前该小组的研究人员已在2020年1月15日的废水样本中检测到了新冠病毒的存在。而 西班牙本土直到今年2月25日才报告首例新冠确诊病例。

巴塞罗那大学公告的这项研究，由该校生物学教授 Albert Bosch 领导，该研究结果已经于 6月13日 发表在未经同行评审的预印本网站  medRxiv 上。研究题为 “Sentinel surveillance of SARS-CoV-2 in wastewater anticipates the occurrence of COVID-19 cases” 。

Albert Bosch 教授称 研究小组检查了2018和2019年的废水样本， 目前仅有2019年3月12日的样本聚合酶链式反应（PCR）检测呈阳性，且病毒水平非常低，其他所有样本的检测结果均为阴性。 他认为，巴塞罗那旅游业发达，游客众多， 这一研究结果表明世界其他地区很可能也发生了类似情况，但许多病例或因被误诊为流感病例而被掩盖。

为分析西班牙 SARS-CoV-2 的存在情况，研究人员对巴塞罗那的两个大型污水处理厂( WWTP1 和 WWTP2 )的 24 小时复合污水样本进行了检测分析。在分析WWTP2 2019 年 12 月至 2020 年 5 月的时间段样本发现了一个出乎意料的结果，分析表明：在 2020 年 1 月 15 日至 3 月 4 日样本中，新冠病毒的基因组就在不断增加，更值得注意的是，巴塞罗那宣布第一例新冠病例( 2 月 25 日)前 41 天( 1 月 15 日)在污水中就能检测到新冠病毒了，研究者认为， 这证明废水监测能够有效地预测新冠病例的人口规模。

具体检测方法：通过用 20％ 聚乙二醇 6000 沉淀将 800 毫升废水样品浓缩，并重悬于 3 毫升 pH 7.4 的 PBS 中， 从 1 毫升浓缩物中进行核酸提取，并使用提取系统以 50 微升洗脱。研究方案采取实时 RT-PCR 检测新冠病毒。

对于废水监测预测新冠病例的人口规模，Nature曾发文梳理：

• Nature：生活废水中也检测出冠状病毒，或可据此推测出包括无症轻症新冠患者真实感染规模，还可提前7-10天发出预警

于是，研究组冰冻保存的WWTP2 样本进行了检测，在对 WWTP2  2018 年( 1 月至 3 月)、2019 年( 1 月、3 月、9 月至 12 月)和 2020 年( 1 月至 3 月)的冷冻污水样品进行检测分析后，有了惊人发现：

检测结果显示，在 2019 年 3 月 12 日的样本中， IP2 和 IP4 靶点检测均呈阳性。

不过，对于该研究，有专业人士评论称：该研究样本污染机会比较多。研究中使用800克的污水加聚乙二醇6000获得沉淀，然后溶解为3毫升。 浓缩步骤不规范。 用的是制备技术，而不是微量分析技术的样品浓缩方法。 应该用膜吸附的方法浓缩， 这里的层析膜是经过验证的，没有任何污染，而且很容易做好空白对照实验。

多位专家也指出：研究人员应该公布测得的基因序列，这样才可以比对出病毒演化位置。

还有人提出一个疑点：为何仅在2019年3月12日的样本中检测到弱阳性，3月份以后都消失了？

“ 现在下结论还为时过早，有可能是假阳性。”

对于该研究， 西班牙公共卫生局Joan Ramon Villalbi博士 表示：

“目前只看到一个结果，我们需要参照更多的数据、研究和样本来证实它，并排除实验室错误或方法漏洞问题。”

参考信息：

1.https://www.ub.edu/web/ub/ca/menu_eines/noticies/2020/06/04html

2.https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.06.13.20129627v1.article-info

版权声明：本文由科研大匠编译自巴塞罗那大学、nature、medrxiv等，仅用于学术分享

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