受猪戊型肝炎病毒pORF3影响的关键的内源性miRNAs的鉴定及其调控靶基因的分子机制

项目名称： 受猪戊型肝炎病毒pORF3影响的关键的内源性miRNAs的鉴定及其调控靶基因的分子机制

项目编号： No.31360618

项目类型： 地区科学基金项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 农业科学

项目作者： 王凤阳

作者单位： 海南大学

项目金额： 49万元

中文摘要： 猪戊型肝炎(SHE)是一种重要的人兽共患传染病. 我们在前期实验中发现, 与HEK293细胞和稳定表达pEGFP的HEK293细胞相比，在稳定表达pEGFP-ORF3的HEK293细胞，miR-221/222显著下调，并且直接调控p27kip1. 为了阐释pORF3 在ex vivo条件下的功能，本课题拟通过慢病毒介导, 获得稳定表达pEGFP-ORF3的猪的肝原代细胞; 应用miRNA 芯片技术分析稳定表达pEGFP-ORF3的猪的肝原代细胞的miRNAs 表达谱, 筛选获得差异表达的内源性miRNAs; 应用定量PCR进行验证; 应用PicTar等软件预测其靶基因; 应用3'UTR报告基因实验验证其结合靶点；应用mimics过表达或inhibitor抑制miRNAs表达实验验证其功能. 从而全面阐释pORF3-内源性miRNAs-靶基因的调控机制，为SHE的预防提供重要依据.

中文关键词： 戊型肝炎；开放阅读框3；稳定细胞系；差异表达基因；

英文摘要： The study of Swine Hepatitis E（SHE）is very important for public health. In order to elucidate the pathogenic mechanism of Swine Hepatitis E virus (SHEV) more clearly, based on the obtained data about SHEVpORF3 study in our lab, miRNA array technique were

英文关键词： HEV；ORF3；stable cell line；DEGs；