单增李斯特菌适配体的结构分析及适配体磁性微球传感器检测方法的建立

项目名称： 单增李斯特菌适配体的结构分析及适配体磁性微球传感器检测方法的建立

项目编号： No.31201374

项目类型： 青年科学基金项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 食品生物污染与控制

项目作者： 吴仁蔚

作者单位： 华中农业大学

项目金额： 22万元

中文摘要： 单增李斯特菌是威胁人类健康的重要食源性病原菌，死亡率高达20%以上，对食品中单增李斯特菌及其生物标志物的快速检测是保障食品安全的重要措施。本研究拟合成一个全长78bp中间含40个随机序列的随机单链寡核苷酸（ssDNA）文库，采用指数富集配体系统进化技术筛选单增李斯特菌的适配体，以Pb2+的竞争性剪切和硫酸二甲酯标记等方法探索适配体二级结构及与功能的关联性，为新型配体的获得提供技术借鉴。亲和素标记适配体作为捕获链，同链霉素亲和素标记的纳米磁性微球相连，同时合成侧翼与捕获链互补的ssDNA并标记荧光素cy3作为显色链，组装磁性微球适配体传感器。与不同浓度的单增李斯特菌发生反应，建立李斯特菌数量与荧光强度之间的关系，实现食品中单增李斯特菌快速和定量检测。

中文关键词： 单增李斯特菌；适配体；磁性微球；ELASA；多重PCR

英文摘要： Listeria monocytogenes are important foodborne pathogens。The mortality is more than 20% .So the rapid detection of Listeria monocytogenes and its biomarkers in food is an important measure to protect food safety. This study would synthesis a random single-stranded oligonucleotide (ssDNA) library, which were 78base pairs and containing 40 random sequences.The exponential enrichment ligand phylogenetic screened aptamers. The secondary structure was determined by lead cleavage and dimethylsurfate modificationg.This provided a reference for screening new ligand.Aptamers were labeled with avidin as the capture chain, connected with the streptomycin-labeled magnetic beads. A complementary strand was labelled with cy3 as detecting signal. This was a aptamer sensor based on magnetic microspheres. The sensor reacted with different concentrations of Listeria monocytogenes, in order to establish the quantitative relationship between the hly concentration and fluorescence intensity of Listeria monocytogenes to achieve the purpose of rapid and quantitative detection of foodborne pathogens.

英文关键词： Listeria monocytogenes；aptamer；magnetic particles；ELASA；multiple PCR