基于脂肪酶活性状态下构象的差异性分析预测突变热点并构建能高效水解胆固醇酯的脂肪酶突变体

项目名称： 基于脂肪酶活性状态下构象的差异性分析预测突变热点并构建能高效水解胆固醇酯的脂肪酶突变体

项目编号： No.31370802

项目类型： 面上项目

立项/批准年度： 2013

项目学科： 生物科学

项目作者： 舒正玉

作者单位： 福建师范大学

项目金额： 80万元

中文摘要： TMP纸浆中胆固醇酯含量的高低直接影响到纸浆树脂沉积量的多少。目前酶法控制TMP纸浆树脂障碍工艺中使用的商品化脂肪酶大都缺乏水解胆固醇酯的活性，降低了脂肪酶控制TMP纸浆树脂障碍的效果。本课题以拥有自主知识产权、在酶法控制TMP纸浆树脂障碍工艺中具有良好应用前景的Burkholderia sp.ZYB002脂肪酶作为原始出发材料，通过同源建模和分子动力学模拟技术，分别构建脂肪酶水解三酰甘油酯及胆固醇酯时，在界面激活及形成酶-底物过渡态复合物过程中，脂肪酶分子在活性状态下的各种构象；比较各种构象之间的差异性，预测影响脂肪酶水解胆固醇酯活性的关键氨基酸残基（突变热点）。构建针对突变热点的小型紧凑型突变基因文库，快速筛选出能高效水解胆固醇酯的脂肪酶突变体；阐明脂肪酶突变体高效水解胆固醇酯的分子机制；制备出少量脂肪酶突变体酶制剂，并与野生型脂肪酶复配，优化复合脂肪酶控制TMP纸浆树脂障碍工艺。

中文关键词： 脂肪酶；胆固醇酯酶；纸浆树脂；蛋白质工程；

英文摘要： The cholesterol ester content in the TMP pulp is positively correlated with the content of pitch deposition. However, most the available commercial lipases don't display the hydrolysis activity to various cholesterol esters, which decreases the lipases' a

英文关键词： Lipase；Sterol esterase；pitch deposits；protein engineering；