ctDNA-NGS试剂盒性能验证研究斩获AACR口头演讲，专家解读研究意义

2018 年 4 月 25 日 转化医学网 安可济

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导读

4月15日，美国癌症研究协会（AACR）2018年年会液态活检分论坛聚集了诸多世界各地的专家学者,其中，肺癌安可康EGFR/KRAS/BRAF ctDNA-NGS试剂盒多中心性能验证项目，作为唯一一个以中国专家为主导的科研项目，备受瞩目。

4月15日，美国癌症研究协会（American Association for Cancer Research，AACR）2018年年会液态活检分论坛(mini symposium: liquid biopsy1) 现场，聚集了诸多世界各地的专家学者，Guardant Health、Inivata、Dana-Farber Cancer Institute等知名企业、研究院所的专家均发表了精彩演讲。其中，肺癌安可康 EGFR/KRAS/BRAF ctDNA-NGS试剂盒多中心性能验证项目，作为唯一一个以中国专家为主导的科研项目，备受瞩目。

▲娄加陶教授于AACR液态活检分论坛发表演讲

该研究由上海交通大学附属胸科医院检验科主任娄加陶教授主持，吉林大学第一医院肿瘤中心、中山大学肿瘤医院肿瘤放射科等专家共同参与，通过多中心的临床样本收集和测试，从标准品、癌症患者血样、健康人血样等多方面，参照血浆数字PCR及组织ARMS同步检测结果，综合评估该试剂盒的检验性能。

虽无“免疫治疗”、“肿瘤早期筛查”等行业热点的加持，该研究项目却能在众多液态活检研究中脱颖而出，获得AACR专家委员会的青睐。项目主持者，同时也是此次AACR分论坛演讲专家的娄加陶教授，详细解读了这一研究的开拓性意义。

娄教授，您认为这一研究被AACR专家委员会选中作为口头演讲的主要原因是什么？

我认为主要与我们的研究紧扣住了目前ctDNA检测临床应用的痛点相关。

在前不久，美国临床肿瘤学会（ASCO）和美国病理家学院（CAP）发表的联合评论中称，ctDNA的临床应用之所以还未能成熟。最主要的原因之一，就是很多基于ctDNA的临床应用并没有建立在对检测方法充分的“实验室性能确认”及“临床性能确认”基础之上。这对于传统的医学检测项目而言，是无法想象的。

▲AACR液态活检分论坛娄加陶教授演讲现场

这种现状产生的根源，还是市场驱动的许多ctDNA检测走得太快，片面求新而忽视了测试的性能验证。我们的团队本着为患者负责的态度，这项研究将ctDNA的检测回归到医学检测这个起点，立足于“准确性”与“临床有效性”这两个关键点，对相关试剂盒进行谨慎地性能验证，采用多种方法进行“头对头”的严格比较。只有这样，才能有效地考量一个技术平台是否准确可靠，才能更深一步谈基于这个平台的医学检测的临床应用价值和意义。我们在这一方向上的努力与尝试，也是获得AACR专家委员会认可的主要原因。

您觉得这项研究，对于国内临床应用ctDNA检测，具有怎样的现实意义？

这项研究还只是一个很初步的尝试。国内有很多同道，也在根据国内外相关机构的共识指南，摸索出在医院内建立高性能ctDNA-NGS检测能力的一个模式。我们的工作只是此类中的一个缩影。

在该项研究中，我们突出了基于标准品的实验室性能验证（分析灵敏度、分析特异性、最低检测下限等）和基于临床样品的临床性能验证，我们选择了多种方法进行“头对头”的比对和校验，我们在选择验证的临床样品时充分考虑到未来真实检测世界中各种临床应用情境。这些研究思路，都是站在检验医学的角度出发的。如果能够对同道开展类似工作提供一定的参考作用，为提升液态活检临床验证程序的规范性与可重复性助力，我觉得这是对该项工作最大的肯定。

▲娄加陶教授AACR液态活检分论坛演讲PPT

您对未来ctDNA-NGS 这项技术在临床上的应用模式有何展望？

ctDNA-NGS是一项临床应用潜力很大的全新技术。我相信在实现规范化和标准化后，这项技术会在很多方向上助力精准医疗。身处在胸科医院这样国内领先的肺癌诊疗机构，我们很重视以新的分子诊断技术前瞻性地建设科室检测能力。长远地看，我觉得在合规的前提下，拥有专业人员及设备的院内医学实验室，有充分的动力自主开展相关检测，来保证对检测流程更高质量的把控，对检测数据的有效积累，同时降低检测成本、缩短检测周期，以求得最终更好地服务于临床医生，服务于患者。

▲AACR2018年会现场

演讲内容摘要

该研究采用安可济集团安可康™ EGFR/KRAS/BRAF 扩增子测序试剂盒，评估了基于cfDNA标准品的分析灵敏度、分析特异性、最低检测下限等检测性能，并随后分析了134位非小细胞肺癌患者及50位健康人的血浆cfDNA样本，并将结果与匹配肿瘤组织ARMS技术及同一血样 ddPCR技术检测的结果进行比较。结果表明，在cfDNA样本量为20ng，该试剂盒的针对AF值（等位基因频率，Allele Frequency）为0.1%时EGFR常见突变，平均检出率为100%，同时所有空白对照样品均未检出“假阳性”。在组织和血浆突变检出一致性上，采用ctDNA-NGS测定的治疗前cfDNA样本中EGFR突变与匹配的肿瘤组织ARMS检测结果一致率为94%，与cfDNA ddPCR检测结果一致率为98％。在定量准确性层面，ctDNA-NGS与cfDNA ddPCR技术相比，AF一致性（R²）为0.95。该项研究还发现NGS可检测多个PCR方法无法检出属于19del类型的de novo突变，也充分体现了ctDNA-NGS的优越性。