【新手福利】初识 外泌体 七

本周周总结会在周日准时发送给大家。今天给各位新进外泌体领域的朋友第七期基础知识介绍，主要科普如下。

图片来源：Shedding light on the cell biology of extracellular vesicles

 

随便放张图，

让推文显得长一点~ 

长~长~长~  

大家都喜欢长的么？ 嘿嘿

 

外泌体样品如何定量？

（之前推文已经反反复复介绍过很多次了，但依旧有很多朋友会问这个问题。这次在【新手福利】初识外泌体系列里再写一次，方便大家寻找和阅读。）

目前外泌体的定量方法主要有三种：

1、通过BCA等方法对分离得到的外泌体进行蛋白定量，用测得的蛋白量来反映外泌体的量，也就是我们经常看到的文章中所谓的使用了多少ug的外泌体。

2、通过纳米粒子计数仪对外泌体的粒子数进行计算，使用粒子数目来反映外泌体的数量，这就是文章中可以看到的使用了多少数目的外泌体。

3、使用外泌体表面特定的某一个标志物的ELISA定量数据来反映外泌体的数量，比如使用CD63 CD81等，这个paper里就很少见了。

对于定量方法的选择，其实三者选一即可，论文前后保持一致即可。

BCA定量容易有杂蛋白影响、纳米粒子计数也存在一定的误差、ELISA分析的外泌体蛋白通常在其他膜结构和游离系统中都会有。这些问题就决定了你分离的外泌体纯度直接影响着你的定量结果。

如果你的外泌体不纯，那用什么方法都没办法比较好的反映你外泌体样品的量；如果你外泌体纯度可以的话，三种方法基本上可以相互替代了。就说这么多吧，要给卖产品的朋友留条活路。

 

外泌体负染电镜的protocol？

很简单。如下：

1、一定体积的细胞上清和体液（根据细胞系和样品种类的不同自行调整）超速离心分离得到的外泌体，重悬于20-30ul PBS中。

2、吸取样品10ul 滴加于铜网上沉淀1min，滤纸吸去浮液。

3、吸取2%的醋酸双氧铀10ul滴加于铜网上沉淀1min，滤纸吸去浮液。

4、常温干燥数分钟。上机。80kv-120kv 成像

 

细胞上清，短时间后才做分离，如何保存？

细胞上清的保存见过很多方法，包括去除细胞碎片后冻-20℃或者-80℃，也见过说直接放在4℃。

个人比较倾向于不超过一周可以放4℃。另外外泌体的保存也试过，基本上4℃存放一周后，再进行粒径分析或者打电镜都不会对外泌体粒径分布和形态有明显影响。 功能实验hzangs没有尝试过，这里无法提供建议了，尝试过的可以留言哦。

 

好了，这一期的科普就扯到这里吧，大家好好消化一下。

 

O(*￣—￣*)o 让我们沐浴春风，收获paper~ 大家加油~

往期新手福利系列↓↓

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【新手必读】外泌体研究大汇总

【新手福利】初识外泌体  二

【新手福利】初识 外泌体 三

【新手福利】初识外泌体（四）—— 国内的朋友都用什么方法分离外泌体

【新手福利】初识 外泌体 五

【新手福利】初识外泌体（六）

【新手福利】如何使用trizol抽提细胞外囊泡中RNA

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